专利ID: 1335
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一种从红景天中提取红景天甙的方法 出售状态：未出售 |
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| 专利号 | 2016104596145 | 专利类型 | 发明专利 |
| 专利分类 | 医药医疗 | 专利状态 | 已下证 |
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专利详细内容
| 专利名： | 一种从红景天中提取红景天甙的方法 | 出售状态： | 未出售 | ||
|---|---|---|---|---|---|
| 专利号： | 2016104596145 | 专利类型： | 发明专利 | 专利分类： | 医药医疗 |
| 专利权人： | 联系人 | 出售价格： | 面议 | ||
详细介绍:
技术领域本发明属于药物提取技术领域，特别涉及一种从红景天中提取红景天甙的方法。背景技术红景天(Rhodiola)为景天科红景天属多年生草本或亚灌木植物，是珍稀药用植物之一，被誉为“高原人参”。该属植物在全世界共约90种,在我国分布70多种,主产于华北、东北、西南、西北和华中等地区。其化学成分主要有黄酮类、酪醇、红景天(Salidroside)、谷甾醇、有机酸、挥发油、多糖、脂肪、蛋白质等。其中,红景天甙及其苷元酪醇是红景天主要有效成份,也是评价红景天及其提取物的最重要指标。现代药理学研究证实，红景天提取物具有抗衰老、抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗缺氧、抗疲劳、抗辐射、抗氧化、镇痛、对中枢神经及内分泌系统双向调节等多种活性，且具有很小副作用。研究一种提高红景天甙抗肿瘤和抗疲劳功效的方法，是本发明的出发点。发明内容本发明所要解决的技术问题是提供一种从红景天中提取红景天甙的方法，该方法制备的红景天甙提取率和纯度高，且能够提高红景天甙的抗肿瘤和抗疲劳功效。为实现上述目的，本发明所要解决的技术方案为：本发明提供一种从红景天中提取红景天甙的方法，包括以下制备步骤：1)取红景天除杂，粉碎，加入其重量9～16倍水，调节pH为3.8～4.8，温度为42～50℃，再加入红景天重量0.03～0.09％的复合酶，酶解100～200min，灭酶，过滤，收集滤液，浓缩滤液至滤液原体积的1/4～1/2，喷雾干燥，得到酶解提取粉；2)再向酶解提取粉中加入酶解提取粉重量12～18倍的甲醇溶液，在350～550W功率下微波提取50～100s，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.12～1.20，加入乙醇溶液沉淀，4000～6000r/min转速下离心3～6min得沉淀；3)将沉淀用红景天原质量6～10倍的无水甲醇进行第一次洗涤，再用红景天原质量4～8倍的无水乙酸乙酯进行第二次洗涤，真空干燥，得到红景天甙。本发明所述的复合酶为纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶裂解酶和脂肪酶的混合物。更优选地，本发明所述步骤1)的复合酶为质量比为15～25:5～10:10～20:1～3的纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶裂解酶和脂肪酶的混合物。更优选地，本发明所述步骤1)的复合酶为质量比为20:8:15:2的纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶裂解酶和脂肪酶的混合物。优选地，本发明所述步骤2)甲醇溶液的体积浓度为60～70％。优选地，本发明所述步骤2)乙醇溶液的体积浓度为85～95％。与现有技术相比，本发明的有益效果在于：1、本发明先用复合酶酶解红景天，最大限度使红景天甙溶出，保证提取率，再结合微波提取，进一步提高红景天甙纯度，最后进行洗涤，最大限度保证红景天甙纯度，同时整个过程的操作，保证了红景天甙的生物活性，有效提高红景天甙抗肿瘤和抗疲劳功效。2、本发明方法易于操作，制备得到的红景天甙提取率和纯度高。3、用小鼠肉瘤180(S180)，按照常规方法进行抗癌试验，接种瘤细胞后24h，腹腔注射(ip)生理盐水(空白组)、现有技术制备得到的红景天甙、本发明方法制备得到的红景天甙，每天一次，每只的注射量为0.5mg/kg，注射8天，红景天甙对实体瘤的影响结果为：相对空白组，现有技术制备得到的红景天甙抑癌率为33.5～41.2％，本发明方法制备得到的红景天甙抑癌率62.4～72.4％，说明本发明方法制备得到的红景天甙的抗肿瘤效果显著提高。具体实施方式以下结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。实施例11)取红景天除杂，粉碎，加入其重量9倍水，调节pH为3.8，温度为50℃，再加入红景天重量0.09％的复合酶，酶解100min，灭酶，过滤，收集滤液，浓缩滤液至滤液原体积的1/4，喷雾干燥，得到酶解提取粉，所述复合酶为质量比为15:10:10:1的纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶裂解酶和脂肪酶的混合物；2)再向酶解提取粉中加入酶解提取粉重量12倍体积浓度为70％的甲醇溶液，在350W功率下微波提取100s，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.12，加入体积浓度为95％的乙醇溶液沉淀，4000r/min转速下离心5min得沉淀；3)将沉淀用红景天原质量6倍的无水甲醇进行第一次洗涤，再用红景天原质量8倍的无水乙酸乙酯进行第二次洗涤，真空干燥，得到红景天甙，经检测，红景天甙的纯度为99.1％。实施例21)取红景天除杂，粉碎，加入其重量11倍水，调节pH为4.1，温度为48℃，再加入红景天重量0.08％的复合酶，酶解120min，灭酶，过滤，收集滤液，浓缩滤液至滤液原体积的1/2，喷雾干燥，得到酶解提取粉，所述复合酶为质量比为18:9:13:3的纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶裂解酶和脂肪酶的混合物；2)再向酶解提取粉中加入酶解提取粉重量14倍体积浓度为68％的甲醇溶液，在400W功率下微波提取90s，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.14，加入体积浓度为85％的乙醇溶液沉淀，4500r/min转速下离心6min得沉淀；3)将沉淀用红景天原质量7倍的无水甲醇进行第一次洗涤，再用红景天原质量7倍的无水乙酸乙酯进行第二次洗涤，真空干燥，得到红景天甙，经检测，红景天甙的纯度为99.2％。实施例31)取红景天除杂，粉碎，加入其重量13倍水，调节pH为4.3，温度为46℃，再加入红景天重量0.06％的复合酶，酶解150min，灭酶，过滤，收集滤液，浓缩滤液至滤液原体积的1/3，喷雾干燥，得到酶解提取粉，所述复合酶为质量比为20:8:15:2的纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶裂解酶和脂肪酶的混合物；2)再向酶解提取粉中加入酶解提取粉重量16倍体积浓度为65％的甲醇溶液，在450W功率下微波提取80s，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.16，加入体积浓度为90％的乙醇溶液沉淀，5000r/min转速下离心5min得沉淀；3)将沉淀用红景天原质量8倍的无水甲醇进行第一次洗涤，再用红景天原质量6倍的无水乙酸乙酯进行第二次洗涤，真空干燥，得到红景天甙，经检测，红景天甙的纯度为99.4％。实施例41)取红景天除杂，粉碎，加入其重量15倍水，调节pH为4.5，温度为44℃，再加入红景天重量0.04％的复合酶，酶解180min，灭酶，过滤，收集滤液，浓缩滤液至滤液原体积的1/3，喷雾干燥，得到酶解提取粉，所述复合酶为质量比为23:6:18:2的纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶裂解酶和脂肪酶的混合物；2)再向酶解提取粉中加入酶解提取粉重量17倍体积浓度为62％的甲醇溶液，在500W功率下微波提取60s，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.18，加入体积浓度为90％的乙醇溶液沉淀，5500r/min转速下离心4min得沉淀；3)将沉淀用红景天原质量9倍的无水甲醇进行第一次洗涤，再用红景天原质量5倍的无水乙酸乙酯进行第二次洗涤，真空干燥，得到红景天甙，经检测，红景天甙的纯度为99.3％。实施例51)取红景天除杂，粉碎，加入其重量16倍水，调节pH为4.8，温度为42℃，再加入红景天重量0.03％的复合酶，酶解200min，灭酶，过滤，收集滤液，浓缩滤液至滤液原体积的1/4，喷雾干燥，得到酶解提取粉，所述复合酶为质量比为25:5:20:1的纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶裂解酶和脂肪酶的混合物；2)再向酶解提取粉中加入酶解提取粉重量18倍体积浓度为60％的甲醇溶液，在550W功率下微波提取50s，过滤，将滤液浓缩至相对密度为1.20，加入体积浓度为85％的乙醇溶液沉淀，6000r/min转速下离心3min得沉淀；3)将沉淀用红景天原质量0倍的无水甲醇进行第一次洗涤，再用红景天原质量4倍的无水乙酸乙酯进行第二次洗涤，真空干燥，得到红景天甙，经检测，红景天甙的纯度为99.1％。试验例：本发明方法制备得到的红景天甙抗疲劳试验选昆明小鼠30只，随机分为3组，分别为对照组、A组(现有技术制备得到的红景天甙)、B组(本发明实施例3制备得到的红景天甙)，每组10只。现A组和B组按每天300mg/kg的剂量给昆明小鼠灌胃，对照组灌胃同体积生理盐水，连续灌胃30d。1、小鼠末次灌胃给药30min后，尾部载5％体重铅皮，置于游泳箱(水深30cm、水温25℃)中游泳，记录游泳开始至死亡(小鼠沉降不露头)时间，即小鼠负重游泳时间。2、小鼠末次灌胃给药30min后分别于30℃水中游泳60min，休息20min后摘眼球取血，分离血清，严格按试剂盒说明测定血清尿素氮及乳酸水平。3、鼠摘眼球取血后立即断颈处死，剖出肝脏，用生理盐水冲洗，滤纸吸干后准确称取肝组织，严格按试剂盒说明测定肝糖原水平。红景天甙对昆明小鼠负重游泳时间及抗疲劳生化指标的影响，具体见表1：表1红景天甙对昆明小鼠负重游泳时间及抗疲劳生化指标注：*和**分别表示与对照组相比存在显著差异(P<0.05)或极显著差异(P<0.01)。从上表可知，本发明方法能够提高红景天甙的抗疲劳功效。
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