利用CBE构建三基因缺失PRV毒株的方法和应用（高校公示15天）（不包年费滞纳金）（需要二变）

本发明公开了利用CBE构建三基因缺失PRV毒株的方法和应用，涉及生物技术领域，选择PRV病毒中gE、TK、gI三基因作为靶标位点，设计sgRNA序列，根据sgRNA上下游序列分别合成单链寡核苷酸，然后退火获得带粘性末端的双链DNA片段，将载体经限制性内切酶酶切后回收片段，再与带粘性末端的双链DNA片段连接，获得连接产物；将连接产物转化至感受态细胞中，涂板筛选培养，挑阳性菌扩大培养，对阳性菌液抽提质粒；将质粒转染，对通过转染获得的病毒进行蚀斑纯化，每一轮均通过PCR扩增与测序的方法进行验证；纯化得到单克隆毒株；本发明方法效率高，对病毒基因的改变小，不引起病毒基因组出现大的结构变异，成本低。

《利用CBE构建三基因缺失PRV毒株的方法和应用（高校公示15天）（不包年费滞纳金）（需要二变）》是一发明专利，专利号为 202311385914X，当前法律状态为已下证，由江西农业大学提出申请，发明人为叶昱;顾俊;曾川;沈金燕;王培霞;唐玉新;王妮;白雨溦;黄冬艳;宋德平，申请日期为2023-10-25，公开（公告）日期为2024-02-20，国际专利分类号（IPC）为 C12N 7/01 (2006.01)，高新资质：未报高企。该专利已下发证书，权利稳定，适合直接办理转让过户，是企业申报高企、项目招投标、质押融资的优质标的。赋翼网提供从选品、尽调、合同签订到官方著录项目变更（过户）的一站式专利转让服务，专业顾问全程协助，确保交易合规、安全、高效。专利摘要：本发明公开了利用CBE构建三基因缺失PRV毒株的方法和应用，涉及生物技术领域，选择PRV病毒中gE、TK、gI三基因作为靶标位点，设计sgRNA序列，根据sgRNA上下游序列分别合成单链寡核苷酸，然后退火获得带粘性末端的双链DNA片段，将载体经限制性内切酶酶切后回收片段，再与带粘性末端的双链DNA片段连接，获得连接产物；将连接产物转化至感受态细胞中，涂板筛选培养，挑阳性菌扩大培养，对阳性菌液抽提质粒；将质粒转染，对通过转染获得的病毒进行蚀斑纯化，每一轮均通过PCR扩增与测序的方法进行验证；纯化得到单克隆毒株；本发明方法效率高，对病毒基因的改变小，不引起病毒基因组出现大的结构变异，成本低。

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